论免疫金标记技术的发展

论免疫金标记技术的发展

　　免疫胶金标记技术的发展已不仅仅局限在其作为示踪标志物的功能方面，已有关于放大检测信号方法研究的报道。生物素?亲和素系统应用于免疫金标记技术，带正电荷的链霉亲和素标记在带负电荷的胶体金颗粒上，又能与生物素紧密结合，使检测信号在只有胶体金标记的基础上得到扩大[14]。Hou等[15]利用缩氨酸与硝酸纤维素膜的相互作用固定生物素抗体于膜上，并分别采用有无银增强金标记技术检测生物素化缩氨酸，无银增强检出限为100 amol/mL，银增强金标记检出限可达100 zmol/mL。Tanaka等[16]将一抗也标记上胶体金，作为信号增强子从而提高检测的灵敏度，可检测到人血清中10 pg/mL HCG，达到了ELISA方法检测的灵敏度。Ambrosi等[17]采用双标记方法将酶标二抗标记在胶体金上，一个15 nm的胶体金颗粒上可以标记约10个酶标二抗分子，其检测灵敏度比常规ELISA方法更高。

　　抗原（Antigen）； 银颗粒（Silver nanoparticle）； 金颗粒（Gold nanoparticle）； 抗体（Antibody）。近年来，免疫胶体金标记技术得到了不断地发展和改进，微波（MW）技术开始应用其中。Galvez等[13]在不改变其它实验条件的情况下采用微波技术进行标记，使标记过程中固定时间至少缩短20 min。 两种技术的结合使标记效果更好，背景清晰，而且缩短染色时间。同时增加反应强度后较常规方法所需抗体浓度低，可节约价格昂贵的一抗。

　　Nam等[18]在免疫金标记技术的基础上发展了BCA（Ｂio?barcode amplification）扩增技术，金颗粒表面修饰了起信号放大作用的条形码DNA和针对待测蛋白的抗体，磁微粒表面则修饰待测蛋白的另一种单克隆抗体。两者与待测蛋白形成复合结构，复合物经过磁场分离，金颗粒受热变性释放条形码DNA，通过对其进行无PCR或PCR检测，间接检测目标蛋白，检出限分别达30和3 amol。经过多次信号放大技术，克服了对酶促反应的依赖，检测灵敏度比ELISA高103～106倍，并可同时检测多个蛋白[19]。钟晓琴等[20]在BCA方法的基础上，将胶体金免疫标记技术与酶免疫标记技术有效地结合起来，制备酶标金探针。其灵敏度高且步骤简单，只需普通光学仪器即可检测蛋白质。通过对免疫金标记技术研究工作的不断深入，必将使该技术的使用效果更佳，应用于更多的研究领域。

　　免疫层析法（Immunochromatography）是20世纪90年代兴起的一种快速诊断技术，胶体金免疫层析技术（GICA）就是利用胶体金本身的显色特点结合免疫层析技术诊断特异性的待测物而发展起来的。这项技术既可采用双抗体夹心法测抗原，又可用间接法、竞争法测抗体。在该技术基础上研制的胶体金免疫层析试纸条、试剂盒操作起来方便快捷，应用前景广阔。

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