人参中的水溶性蛋白含量测试论文

时间:2021-06-13 09:33:13 论文 我要投稿

人参中的水溶性蛋白含量测试论文范本

  1 仪器与材料

人参中的水溶性蛋白含量测试论文范本

  DS-1型高速组织捣碎机(上海标本模型厂);高速离心机Minispin(德国Eppendorf公司);CP225D型电子天平(十万分之一,北京赛多利斯仪器系统有限公司);透析带(XH420,截留分子量:6000-8000);LL3000 型冷冻干燥机(德国Heto公司);Multiskan MK3型酶标仪(Thermo公司);DYY-8C型电泳仪(北京六一仪器厂);JD801凝胶电泳图像分析系统(江苏省捷达科技发展有限公司);

  Tris(Sigma公司);硫酸铵(Sigma公司);SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳低分子量标准蛋白(分子量依次为:97.0 kDa,66.2 kDa,43.0 kDa,31.0 kDa,20.1 kDa,14.4 kDa),购自于中科院上海生物化学研究所。其它试剂均为国产分析纯。

  5年生园参、野山参及西洋参均购自于吉林省靖宇县,经长春中医药大学研发中心姜大成教授鉴定,人参为五加科(Araliaceae)植物Panax ginseng C. A. Meyer的干燥根茎,野生者为野山参。西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根茎,符合《中国药典》(2005版Ⅰ部)的规定。

  2 方法与结果

  2.1 园参、野山参、西洋参水溶性蛋白的制备

  取5年生园参、野山参、西洋参鲜品适量,称重,高速组织捣碎机粉碎,加适量含0.15 mol/L NaCl的pH 7.4 10 mmol/L Tris-HCl缓冲液,4℃浸提24h,10 000 r/min离心10min,上清液用80%硫酸铵沉淀,4℃静置过夜,沉淀加适量体积的pH7.4 10mmol/L Tris-HCl缓冲液溶解,对蒸馏水过夜透析,-20℃预冻,冻干,得三者的水溶性蛋白,收率见表1。由表1可知,野山参及西洋参中水溶性蛋白的含量较园参中的蛋白低很多,西洋参中的水溶性蛋白为园参的50%左右,而野山参中的水溶性蛋白,仅为园参的10%。

  2.2 SDS-PAGE检测及凝胶图谱分析

  取上述制备的蛋白样品各5 mg,用蒸馏水配制成浓度为5 mg/ml的蛋白溶液,经SDS-PAGE检测(分离胶浓度为15%,浓缩胶浓度为5%。浓缩胶电压为70 mV,分离胶电压140 mV。电泳结束后用考马斯亮蓝R250染色,最后用含45%甲醇和10%冰醋酸的水溶液脱色至背景清晰),结果见图1。

  采用JD801凝胶电泳图像分析系统对电泳结果进行分析,生成各泳道密度曲线图[横轴为泳带的迁移率(Rf),纵轴为泳带的积分光密度值(IOD)],结果见图2~5,每条泳带对应的分子量、迁移率、积分光密度值及其百分比(每条泳带的`积分光密度值占整个泳道所有条带积分光密度值的百分比)见表2~5。

  由电泳结果可知,园参、野山参和西洋参的水溶性蛋白存在很大的差异,尤其是园参与野山参的差异最大。通过JD801凝胶电泳图像分析系统的分析结果可以看出,三者的蛋白的分子量主要分布在60 000~10 000Da范围内,但在含量上却存在很大的不同。园参蛋白包括分子量为60 229.34Da,38 819.94Da,27 634.28Da,25 151.99Da,21 276.71Da,18 187.72Da,16 467.65Da,10 448.78Da等8种蛋白,含量均比较高,其中分子量为27 634.28Da和25 151.99Da的蛋白的含量最高,其次为分子量60 229.34Da,16 467.65Da的两种蛋白;野山参蛋白包括分子量为60 229.34Da,48 607.40Da,38 617.48Da,28 218.35Da,26 641.09Da,22 536.37Da,14 832.50Da,9 313.36Da等8种蛋白,但含量比较高的蛋白只有两种,分子量分别为60 229.34Da,14 832.50Da,其它几种蛋白的含量较园参均比较低;西洋参蛋白包括分子量为60 229.34Da,41 118.23Da,39 023.45Da,27 634.28Da,21 840.31Da,18 572.13Da,15 466.11Da,10 781.79Da等8种蛋白,其中分子量为27 634.28Da, 60 229.34Da,18 572.13Da 3种蛋白的含量较高,其它几种蛋白的含量较园参也均比较低。

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